免染SDS-PAGE胶，解锁蛋白电泳新宝藏
发布时间：2023-09-27 浏览次数：221
1.免染SDS-PAGE胶原理和特点
免染SDS-PAGE胶使用的免染成像技术可实现电泳和转印过程中诸多环节的蛋白条带可视化，该技术使用独特的三卤化合物添加到凝胶中，该三卤化合物与色氨酸残基共价结合，仅需短时间的紫外光激活使变性蛋白质直接在凝胶中发出荧光，实现蛋白的可视化，操作流程简单，可检测低至10—25 ng的蛋白质。
该方法实现了蛋白质在凝胶中的可视化，荧光基团与蛋白质分子共价结合，直接可在转印后的凝胶及膜上成像，无需额外的染色和脱色步骤，并在转印后的膜上依然可见，不会干扰电泳或下游实验步骤。
此外，免染成像可消除内参蛋白作为蛋白质印迹上样对照的内在问题，从而使用户能够通过将条带对每个泳道中的总蛋白归一化来获得真正定量的蛋白质印迹数据。
2.免染SDS-PAGE胶使用过程
图1 免染SDS-PAGE胶使用过程
3.免染SDS-PAGE胶技术优势
免染凝胶获得的蛋白质可视化数据与其他染料染色的凝胶数据具有可比性。一般来说，免染凝胶的灵敏度与考马斯亮蓝染色相近（见图2）。使用免染凝胶技术可以在电泳后立即可视化蛋白，同时做western-blot时可在抗体孵育前验证目标蛋白是否从凝胶转印到膜上，而无需染色/脱色步骤，可节省时间2-4 h。
左：免染SDS-PAGE凝胶成像；右：普通考马斯亮蓝染色
泳道1：ATCC25922(大肠杆菌),
泳道2：FSCC215239（沙门氏菌）;
泳道3:ATCC27562（创伤弧菌）
泳道4:FSCC2150497（沙门氏菌）泳道5:ATCC33847（副溶血性弧菌）
图2 免染凝胶成像与考马斯亮蓝染色对比图
4.常见问题
问题1：我是否需要购买新的缓冲液和试剂才能使用免染技术？
回答：免染凝胶不使用专门的缓冲液或试剂。可以使用标准的SDS-PAGE缓冲液，但需要能够激活染料并可视化的成像仪。
问题2：由于免染技术利用色氨酸残基进行化学偶联，是否影响我对总蛋白的检测？
回答：从理论上讲，即使只有一个色氨酸残基也足以激活信号，并且可以轻松检测和定量只有两个色氨酸残基的蛋白质。对于大多数应用，色氨酸残基用于可视化的要求不是问题。UniProt数据显示所有物种所含的蛋白质中只有约10%缺乏色氨酸，且大多数蛋白质的大小都小于10 kD。在大多数生物中，大约90%的蛋白质大小超过10 kD（在10—260 kD 范围内）并具有色氨酸残基（表 1）。
表1. 几种模型生物的预测蛋白质组的色氨酸含量
