原代细胞分离培养及实例应用
发布时间：2023-09-21 浏览次数：220
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。
原代细胞的分离与培养方法：
1. 组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
2. 消化培养法
组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和 非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状 变成 絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠 瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
3. 悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
4. 器官培养
器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。
应用实例
一.大鼠神经元细胞（酶消化法）
简述：新生24h或E18胎鼠，取脑，剥离海马，剪碎，木瓜酶消化，清洗过筛后铺于多聚赖氨酸包被的培养板中。
二.大鼠雪旺细胞（植块法）
简述：新生24h大鼠，取坐骨神经，剥去外膜和束膜，剪成1mm3的小块，均匀铺于培养皿内，加少量血清，37℃ CO2培养2h后，再加入培养基，24-48h后有细胞爬出。
三.家兔阴茎海绵体平滑肌细胞（消化后植块法）
简述：新鲜阴茎标本立刻在0 ～4 ℃Hanks 缓冲液及含少量DMEM 的液体中清洗，锋利刀片尽快切除皮肤、白膜、尿道及尿道海绵体等组织，将阴茎海绵体组织块移入含 DMEM培养液的培养皿，把组织块切割成1 mm ×1 mm ×1 mm 碎屑块， 并移入无菌锥型管，加入Hanks 缓冲液冲洗，去除粘附于组织块上的细菌， 再以25 ml 37 ℃预热的DMEM 培养液冲洗碎屑1 次。随后将组织碎屑放入6 孔、35 mm 的 细胞培养皿， 每孔4 ～ 5 块组织碎屑， 使组织块贴壁， 每孔注入4 ml DMEM 培养液， 小心置入37 ℃、5 %CO2 、95 %空气的细胞培养箱。一般2~3天就有细胞游离出来。
注意事项
1. 取材的组织要尽快培养。如若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果组织块很大，应切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。
2. 从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材，可用含500～1000u/ml的青-链霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再作培养。
3. 组织块不易贴壁，可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。
4. 原代培养的1～2d内要特别注意观察是否有细菌、真菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除。
原代细胞的应用前景：原代细胞在细胞学研究、遗传学研究、肿瘤研究、药物筛选、细胞移植、类器官培养等众多领域备受欢迎，且原代细胞在生物医药领域的应用市场前景广阔。
来源：“上海昆盟生物科技有限公司”公众号，作者~Coweldgen ！
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