细胞完全培养基配置使用方法
发布时间：2023-06-30 浏览次数：177
细胞培养体系一般由以下四种（三种）组成：
| 名称 | 体积 | 保存条件 |
| 基础培养基 | 500mL | 4°C、避光 |
| 添加剂 | 5mL | -20°C、避光 |
| 胎牛血清(FBS) | 0-50mL | -20°C、避光 |
| 双抗（青霉素/链霉素，P/S） | 5mL | -20°C、避光 |
添加剂和双抗通常浓度为 100X（100 倍工作浓度）。血清的添加比例有 0%（不添加），1%（5mL）， 2%（10mL），5%（25mL），10%（50mL）几种。【大多数实验室使用的完全培养基配置方法为：450~500ml DMEM培养基+50ml FBS（胎牛血清）+5ml双抗】
第一次使用时先将-20℃保存的添加剂、双抗、FBS 转移到 4℃溶解后，在灭菌后的百级洁净等级环境中操 作，所使用的容器和移液耗材均需要进行过无菌处理。
首先将解冻的 FBS、添加剂和双抗进行分装，平均分装成 5-10 份，留下本次配制所需要的量， 剩余的继 续放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制完全培养基，避免反复冻融。
建议用无菌的 50mL离心管 盛装配置好的完全培养基
配制方法：在每个 50mL 离心管中加入①500uL 添加剂、②500uL 双抗、③50×血清百分比 mL 的胎牛血清、④（50×（1-血清百分比）-1）mL 的基础培养基。配制完成后盖上盖子，颠倒混匀备用。
例如：在血清比例为 5%的条件下，50mL 离心管中各组分的体积分别为：
基础培养基：（50×（1-5%）-1）=46.5mL+
添加剂：500uL +
双抗：500uL+
血清：50×5%=2.5mL
配置好的培养基置于 4℃避光保存。由于添加剂中有很多重组蛋白，易发生降解，故配置好的完全培养基 有效期仅为 3-4 周，请尽快使用。因此建议每次配制 1-2 管（50-100mL），当然使用量大的情况下也可以 适量增加配置量。
P. S.：不建议客户将全部的血清、双抗、添加剂直接加入基础培养中混匀使用，原因如下：
1. 500mL 的基础培养基的体积较大，灌装时体积波动很大，直接加入，无法准确地控制因子和血清的工作 浓度。
2. 配制好的培养基仅能在 4℃保存 3-4 周，如果期间没用完，继续使用会影响培养效果。如果是-20℃保存，可以延长保存时间，但是反复冻融也会影响完全培养基的效果。
3. 如果使用培养基时由于操作失误导致污染，分装能减少培养基的损失量。
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