GB4789.11-2014 β型溶血性链球菌检验流程（国家标准）
发布时间：2022-03-01 浏览次数：1756
6 操作步骤
6.1 样品处理及增菌
按无菌操作称取检样 25 g（mL），加入盛有 225 mL mTSB 的均质袋中，用拍击式均质器均质 1 min～2 min；或加入盛有 225 mL mTSB 的均质杯中，以 8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min。若样品为液态，振荡均匀即可。36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
6.2 分离
将增菌液划线接种于哥伦比亚 CNA 血琼脂平板，36 ℃±1 ℃厌氧培养 18 h～24 h，观察菌落形态。
溶血性链球菌在哥伦比亚 CNA 血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约 2 mm～3 mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生 β 型溶血。
6.3 鉴定
6.3.1 分纯培养
挑取 5 个（如小于 5 个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和 TSB 增菌液， 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
6.3.2 革兰氏染色镜检
挑取可疑菌落染色镜检。β 型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
6.3.3 触酶试验
挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量 3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β 型溶血性链球菌触酶为阴性。
6.3.4 链激酶试验（选做项目）
吸取草酸钾血浆 0.2 mL 于 0.8 mL 灭菌生理盐水中混匀，再加入经 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 的可疑菌的 TSB 培养液 0.5 mL 及 0.25%氯化钙溶液 0.25 mL，振荡摇匀，置于 36 ℃±1 ℃水浴中 10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续 36 ℃±1 ℃培养 24 h，凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解为阴性，β 型溶血性链球菌为阳性。
6.3.5 其他检验
使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。
7 结果与报告
综合以上试验结果，报告每 25 g（mL）检样中检出或未检出溶血性链球菌。
