English

实验室环境和人体表面微生物的检测

发布时间:2014-06-23      浏览次数:2136    分享:

  平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分,当取自不同来源的样品接种于培养基上,在37℃温度下培养,1~2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖,形成一个可见的细胞群体的集落,称为菌落。

  每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点,例如菌落的大小,表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑,边缘整齐或不整齐,菌落透明或半透明或不透明,颜色以及质地疏松或紧密等。因此,可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

微生物检测材料

微生物

试剂、试剂盒

  肉膏蛋白胨琼脂

仪器、耗材

  灭菌棉签  接种环  试管架  酒精灯

实验步骤

1.写标签

  任何一个实验,在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号,培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上,同时观察两个以上培养皿的结果,打开皿盖时,容易混淆。用记号笔写上班级、姓名、日期,本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等),字尽量小些,写在皿底的一边,不要写在当中,以免影响观察结果。

2.实验室细菌检查

  (1)空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室,移去皿盖,使琼脂培养基表面暴露在空气中;将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室,移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。

  (2)实验台和门的旋钮

  ①用记号笔在皿底外面中央画一直线,再在此线中间处画一垂直线。

  ②取棉签左手拿含有棉签的试管,在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽),将其取出,将管口很快地通过煤气灯(或酒精灯)的火焰,烧灼管口;轻轻地倾斜试管,用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞(或试管帽),并将空试管放在试管架上。

  ③弄湿棉签左手取灭菌水试管,如上法拔出棉塞(或试管帽)并烧灼管口,将棉签插入水中,再提出水面,在管壁上挤压一下以除去过多的水分,小心将棉签取出,烧灼管口,放回棉塞(或试管帽),并将灭菌水试管放在试管架上。

  ④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2平方厘米的范围。

  ⑤接种,A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入,在琼脂表面顶端接种(滚动一下),立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞(或试管帽),烧灼管口,插入用过的棉签,将试管放回试管架。

  ⑥划线另取接种环在火焰上灭菌,先将环端烧热,然后将接种环提起垂直放在火焰上,以使火焰接触金属丝的范围广一些,待接种环烧红,再将接种环斜放,沿环向上,烧至可能碰到培养皿的部分,再移向环端,如此很快地来回通过火焰数次。

  左手拿起平板,同样开启一缝,将灭过菌并冷却了的接种环(可在琼脂表面边缘空白处试温度,若发出溅泼声,表示太烫),通过琼脂顶端的接种区,向下划线,直到平板的一半处。注意:接种环与琼脂表面的角度要小,移动的压力不能太大,否则会刺破琼脂。

  闭合皿盖,左手将平板向左转动至空白处,右手拿的接种环再在火焰上烧灼,使冷。接种环通过前面划的线条再在琼脂的另一半,从上向下来回划线至1/2处。

  烧灼接种环,转动平板,划最后1/4,立刻盖上皿盖,烧灼接种环,放回原处。整个划线操作均要求无菌操作,即靠近火焰,而且动作要快。

3.人体细菌的检查

  (1)手指(洗手前与洗手后)

  ①分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(当然,班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的)。

  ②移去皿盖,将未洗过的手指在琼脂平板的表面,轻轻地来回划线,盖上皿盖。

  ③用肥皂和刷子,用力刷手,在流水中冲洗干净,干燥后,在另一琼脂平板表面来回移动,盖上皿盖。

  (2)头发:在揭开皿盖的琼脂平板的上方,用手将头发用力摇动数次,使细菌降落到琼脂平板表面,然后盖上皿盖。

  (3)咳嗽:将去盖琼脂平板放在离口约6~8 cm 处,对着琼脂表面用力咳嗽,然后盖上皿盖。

  (4)鼻腔

  ①按照实验台检查法的步骤②和③,取出棉签,并将其弄湿。

  ②用湿棉签在鼻腔内滚动数次。

  ③按实验台检查法的步骤④和⑤,接种与划线,然后盖上皿盖。

4.将所有的琼脂平板翻转,使皿底在上,放37℃培养箱,培养1~2天。

5.结果分析

  (1)菌落计数在划线的平板上,如果菌落很多而重叠,则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板,也一分为四,数1/4面积的菌落数。

  (2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意,如果细菌数量太多,会使很多菌落生长在一起,或者限制了菌落生长而变得很小,因而外观不典型,故观察菌落的特点时,要选择分离得很开的单个菌落。

菌落特征描写方法

  ①大小大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下,再决定大、中、小的标准,或由教师指出一个大小范围。

  ②颜色黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。

  ③干湿情况干燥、湿润、粘稠。

  ④形态圆形、不规则等。

  ⑤高度扁平、隆起、凹下。

  ⑥透明程度透明、半透明、不透明。

  ⑦边缘整齐、不整齐。

相关产品