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食品中双歧杆菌检验的解决方案 GB 4789.34-2012

发布时间:2014-10-31      浏览次数:2965    分享:

  我公司针对目前乳制品行业及质量监测单位检验双歧杆菌的需求及情况,对双歧杆菌检验相应的培养基进行了改进,使得双歧杆菌检出率较之前有很大的改进。扩充并完善了相关的微生物检测试剂,使得技术操作人员能更准确、快捷的检测出目标菌。

  现我公司,依据GB 4789.34-2012食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验,推出成套的双歧杆菌检验解决方案,为生产企业及检验单位提供方便。

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  图1:GB 4789.34-2012双歧杆菌检验流程图

 

  表1:实验操作所用培养基及生化试剂

功能阶段

实验
序号

产品序号

产品名称

规格

类别

稀释液

1

CP0630

生理盐水

225mL×10

盒(袋装)

平板分离

2

027330

双歧杆菌琼脂培养基(BBL琼脂培养基)

250g

瓶(干粉)

生理生化

3

029010

革兰氏染色液

10mL×4

4

029161

过氧化氢酶试剂

2mL×10

盒(西林瓶)

5

027340

PYG液体培养基基础

250g

瓶(干粉)

SR0300

PYG液体培养基配套试剂
AB各一支添加于100 ml基础培养基中)

2种×5/

盒(西林瓶)

6

027350

TPY液体培养基

250g

瓶(干粉)

7

029010

革兰氏染色液

10mL×4

8

029080

甘油

2mL×10

盒(西林瓶)

9

075060

D-阿拉伯糖

20

盒(西林瓶)

10

075400

D-核糖

20

盒(西林瓶)

11

075070

D-木糖

20

盒(西林瓶)

12

075080

D-半乳糖

20

盒(西林瓶)

13

075010

D-葡萄糖

20

盒(西林瓶)

14

075550

D-果糖

20

盒(西林瓶)

15

075380

D-甘露糖

20

盒(西林瓶)

16

075110

L-鼠李糖

20

盒(西林瓶)

17

075100

卫矛醇

20

盒(西林瓶)

18

075120

肌醇

20

盒(西林瓶)

19

075040

甘露醇

20

盒(西林瓶)

20

075090

山梨醇

20

盒(西林瓶)

21

075160

七叶灵(七叶苷)

20

盒(西林瓶)

22

075140

水杨甙(水杨苷,水杨素)

20

盒(西林瓶)

23

075570

D-纤维二塘

20

盒(西林瓶)

24

075030

D-麦芽糖

20

盒(西林瓶)

25

075020

D-乳糖

20

盒(西林瓶)

26

075560

D-蜜二糖

20

盒(西林瓶)

27

075050

D-蔗糖

20

盒(西林瓶)

28

075530

D-海藻糖(覃糖)

20

盒(西林瓶)

29

075540

菊糖(菊根粉)

20

盒(西林瓶)

30

075430

D-松三糖

20

盒(西林瓶)

31

075230

D-棉籽糖

20

盒(西林瓶)

32

075480

淀粉

20

盒(西林瓶)

33

075420

D-松二糖

20

盒(西林瓶)

 

 GB 4789.34-2012食品卫生微生物学检验 双歧杆菌检验 操作步骤

  1 样品制备

  1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

  1.2 以无菌操作称取25 g(mL)样品,置于装有225 mL 生理盐水的灭菌锥形瓶内,制成1:10 的样品匀液。

  2 稀释及涂布培养步骤

  2.1 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1.0 mL,沿管壁缓慢注于装有9 mL 生理盐水的无菌试管中(注意吸管尖端不要触及稀释液),振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。

  2.2 另取1 mL 无菌吸管或微量移液器吸头,按5.2.1 操作顺序,做10 倍递增样品匀液,每递增稀释一次,即换用1 次1 mL 灭菌吸管或吸头。

  2.3 根据待鉴定菌种的活菌数,选择三个连续的适宜稀释度,每个稀释度吸取0.1 mL 稀释液,用L棒在双歧杆菌琼脂平板进行表面涂布, 每个稀释度作两个平皿。置36 ℃±1 ℃ 温箱内培养48 h±2 h,培养后选取单个菌落进行纯培养。

  3 纯培养

  挑取3 个或以上的菌落接种于双歧杆菌琼脂平板,厌氧,36 ℃±1 ℃ 培养48 h。

  4 镜检及生化鉴定

  4.1 涂片镜检

  双歧杆菌菌体为革兰氏染色阳性,不抗酸、无芽孢,无动力,菌体形态多样,呈短杆状、纤细杆状或球形,可形成各种分支或分叉形态。

  4.2 生化鉴定

  过氧化氢酶试验为阴性。选取纯培养平板上的三个单个菌落,分别进行生化反应检测,不同双歧杆菌菌种主要生化反应见国标附录B。

  5 有机酸代谢产物测定

  气相色谱法测定双歧杆菌的有机酸代谢产物, 见国标附录C。

  6 报告

  根据镜检及生化鉴定的结果(4)、双歧杆菌的有机酸代谢产物乙酸与乳酸微摩尔之比大于1(5),报告双歧杆菌属的种名。

  相关国标下载地址:

GB 4789.342012食品安全国家标准食品微生物学检验 双歧杆菌的鉴定

http://www.huankai.com/Train/HBdetail_105020015_100000016288413.html

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