细胞实验常见问题
发布时间：2025-08-19 浏览次数：23
1.如何选用细胞系培养基？
优先根据细胞来源公司提供的培养条件，其次参考ATCC推荐细胞对应培养基。一般建议不要随意更换培养基种类。细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用与原先提供的培养条件不同的培养基，可能造成细胞形态发生变化或无法存活，以及细胞的表型功能丢失。
2.细胞发生微生物污染时，应如何处理？
直接丢弃或更换，将未受污染的细胞转移至其它培养箱，并用消毒剂消毒培养器皿和超净台以及二氧化碳培养箱。如发生真菌霉菌污染，需用紫外灯照射整个细胞间，从而消除可能产生的孢子。同时排除使用试剂的污染，包括培养基和血清，可以空培试验。
3.为何培养基用一段时间后，颜色偏紫？
培养基随着多次开盖会使培养液CO2 逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性从而变紫，尤其是剩余的培养基越少越容易变紫。可将培养瓶瓶盖旋松放入二氧化碳培养箱校正溶液PH值，过一段时间就会变回正常。变紫的培养基是可以继续使用的，培养细胞时在培养箱会自动恢复颜色。
4.细胞培养液变黄变浑，如何处理？
细胞培养液变黄多半是细胞密度过大，细胞增殖速度过快，产生大量酸性代谢废物，导致细胞营养不足。而培养液变浑多半是发生了细菌污染。出现这种情况应立即进行消化传代处理。
5.血清中出现的沉淀是什么，有影响吗？
① 纤维蛋白，是经常出现的较大沉淀物，可达到1-2mm，用肉眼可观察到；
② 胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质，是血清出现沉淀物的常见原因；
③ 磷酸钙，也是一种常见沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养时会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
这些沉淀对细胞的生长是没有影响的，如想去除沉淀，尽量采用离心方法，不建议使用过滤方法，因为会堵塞滤膜而且会造成污染的风险。
6.细胞何时换液最佳？
① 细胞消化传代后，建议隔天或隔两天换一次液；
② 细胞传代后，发现碎片多、死细胞多，在细胞形态已经形成的前提下可第二天换液；
③ 对于生长速度较慢的细胞，可多放点培养基，减少换液次数，让细胞静养；
④ 细胞传代后，细胞分布不均、细胞堆叠、细胞间隙大、局部密度大，这些情况下不用换液，可采取消化重铺的方式。
7.细胞支原体污染如何处理？
支原体污染是比较难去除的，特别容易复发，一般建议直接更换新的细胞，如特别精贵或重要的细胞可尝试使用四环素、大环内酯类抗生素（泰乐霉素）、喹诺酮类抗生素。
8.如何控制胰酶消化时间？
胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤。消化过度，细胞碎片增多，黑渣子增多，细胞会成片脱落，严重影响细胞活性，导致部分细胞漂浮；消化不足，则细胞难于从瓶壁脱落，反复吹打同样也会损伤细胞活性。
不同细胞对消化液的敏感性不同，胰酶消化的时间也会有差异。像疏松贴壁的293T和Lncap可能1-2min，正常贴壁的Hela和A549可能2-3min，贴壁较牢的HEPG2和CACO-2可能5min，贴壁非常牢的5637和A431可能10min左右。具体消化时间以消化到细胞变圆收缩、细胞间隙变大、轻轻晃动培养瓶能看到细胞呈流沙状即可终止。
9.如何避免血清沉淀物的产生?
① 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)；
② 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生；
③ 请勿将血清置于37℃太久，否则会变混浊，同时许多较不稳定的成分也会因此受到损害，从而影响血清质量。
血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可无须做此步骤。
10.对细胞形态有疑问？
① 确定细胞所使用的培养基种类是否为说明书建议的。改变培养基种类细胞形态可能会有变化；
② 以引种公司官网细胞照片为准，其次可以参考ATCC或DSMZ网站的图片；
③ 如上皮型细胞明显成为成纤维细胞，或成纤维细胞明显成为上皮型细胞，需查看细胞是否提供STR鉴定报告，身份是否正确；
④ 细胞的代次是否过高导致分化变异、细胞是否经过加药诱导、细胞是否经过转染等都会引起细胞形态发生变化；
⑤ 细胞低密度和高密度形态不一，还有一些细胞呈现形态较慢，细胞要1-2天才能伸展开。所以细胞的正常形态要等细胞密度起来后才能确定。
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