胎牛血清冻存和融化注意事项
发布时间：2023-04-28 浏览次数：252
不同于其它常用的实验方法，细胞培养是一个动态的过程。胎牛血清作为细胞培养一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长产生极大的影响。作为胎牛血清的主要供应商之一，我们经常收到焦急的客户来电，称血清出现了什么问题。小编将针对血清如何储存、融化、为何出现沉淀以及如何减少沉淀做出详细说明，旨在帮助客户解决血清出现的问题。
血清沉淀
01 血清非人工产品，沉淀出来系自然现象
● 纤维蛋白原(主要)
● 盐析出。如磷酸钙等
● 胆固醇和脂肪酸
● 蛋白析出
02 沉淀在下列情况下还会增加:
● 血清热灭活
● 37℃培养(常常由此引发歧异)
● 反复冻融
● 溶解过程中没有摇匀
● 伽马射线照射
● 长期存放在2-8°C
● 血清加入到 RPMI1640 中时，沉淀往往会发生或增加
● pH升高时，沉淀会增加
● 在培养板或培养皿中，因为培养基的蒸发也会导致沉淀的增加
03沉淀不会影响其对细胞的促生长作用
● 技术人员对此问题有过深入研究证明
● 请注意一个例外：沉淀影响巨噬细胞的培养
04 这种现象发生在所有的血清中
● ln*品牌的网站上说“G”品牌的胎牛血清没有预老化，如果存放在2-8℃，血清中的各种蛋白或酯类有可能会凝聚析出，出现沉淀或混浊。这种不会影响血清对细胞的促生长作用。我们建议把血清存放在-20℃，并避免反复冻融。
● S*品牌胎牛血清说明书中说:“在熔化过程中混浊多絮状沉淀，这种现象对多数血清来说是正常的，并不影响其使用质量。但它影响血清的外观，影响瓶与瓶之间的一致性。
05 血清并没有被污染
● 检测血清是否被污染最好的方法是将血清接种到血酯板上，培养后看是否有菌落形成.
● 在1000x显微镜下，有经验的微生物学家通过观察有无格兰仕染色的细菌，也可以判断血清是否被污染
如何去除血清中的沉淀?
● 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养液中。
● 不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为可能阻塞滤膜。
血清溶解建议-如何减少沉淀
● 将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱12-24小时左右使之浴解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
● 切勿将刚刚从-20℃冰箱里拿出来的血清直接放在水浴中，无论室温的水或者37℃的水，因为在水浴中血清迅速熔化，很大的温差(-20℃到37℃，温差为57℃)极其容易造成血清产生沉淀。
● 直接放65℃水浴中更是极其残忍的做法，是对血清的亵玩，对科学规则的粗暴践踏!
● 血清应该在-10℃以下保存。若一次无法用完一瓶，应该无菌分装，再冷冻保存。
胎牛血清冻存的注意事项
1. 需要长期保存的血清有必要储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时刻切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因而，血清在冻入低温冰箱前，有必要预留一定体积空间，不然易发生污染或玻璃瓶冻裂。
2. 合规生产企业供给的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤器过滤血清。
3. 瓶装血清冻结需采用逐渐冻结法：-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装，在溶解过程中需不断悄悄摇晃均匀(小心勿形成气泡)，使温度与成分均一，削减沉积的发作。切勿直接将血清从-20℃进入37℃融化，温差大的情况下血清容易形成蛋白质凝聚而出现沉积和沉淀絮状物。
4. 热灭活是指56℃，30分钟加热已彻底冻结的血清。加热过程中须规矩摇晃均匀。目的是使血清中的补体成分(complement)灭活，除非有必要，一般不建议做此热处理，因为热处理会形成血清沉积增多，而且还会影响血清的质量。补体参与反应有：滑润肌细胞收缩、肥大细胞和血小板释放组胺、增强吞噬作用、促进淋巴细胞和巨噬细胞发作化学趋化和活化。相关研究的使用者可以考虑血清增加热灭活处理。
5. 切勿将血清在37℃放置太久或者反复冻融，不然血清会变得污浊，同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量。
6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白变性及冻结后血清中纤维蛋白形成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可分装至无菌离心管400g离心去除，也可不用处理直接加入培养基内一起培养。完全不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
7. 显微镜下小黑点是由于经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多，有些沉淀物在显微镜呈现为黑点，常误认为血清受污染。
来源：东创实验科研服务 ”公众号
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