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CCK-8检测原理、优势及注意事项大盘点
发布时间：2022-12-12 浏览次数：1288
CCK8是Cell Counting Kit-8缩写，直译为：细胞计数试剂。WST-8用于测定细胞增殖和毒性分析。
CCK-8检测原理
WST-8在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被细胞线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
| 检测方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜产物的水溶性 | 差（需加有机溶剂溶解再检测） | 好 | 好 | 好 |
| 产品形状 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 配成溶液后使用 | 现配现用 | 即开即用 | 即开即用 |
| 检测灵敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 检测时间 | 较长 | 较短 | 较短 | 最短 |
| 检测波长 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 细胞毒性 | 高，细胞形态完全消失 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 |
| 试剂稳定性 | 一般 | 较差 | 一般 | 很好 |
| 批量样品检测 | 可以 | 非常适合 | 非常适合 | 非常适合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较
相比之下，CCK-8的甲臜产物水溶性好，无需现配现用，灵敏度高，检测时间最短，试剂稳定性好，可实现批量检测，加上酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰，而且CCK-8的细胞毒性非常低，加入CCK-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间，因此CCK-8法成为细胞增殖测定的首选方法。
注意事项：
细胞铺板：铺板时需不停混匀细胞悬液，这样每孔细胞的接种密度的误差才会小。建议每隔12个孔左右吹打混匀一次细胞悬液。
CCK-8添加时间问题：虽然建议种板4小时后细胞贴壁即可添加CCK-8，但是细胞忽然换了环境，4个小时细胞状态可能还不够稳定，如果过早添加CCK-8，由于细胞状态不稳定容易导致实验结果的可重复性差，所以可以采取种板过夜后添加CCK-8方法。
细胞的接种密度问题：通常建议每孔3-8千个细胞，细胞数过少或过密都会对细胞状态有影响。一般以显微镜下每孔密度大约为75-80%的时候加药，该密度下结果更为稳定。如果接种细胞数量过少，也可以在板中孵育细胞密度至80%左右再加药。
CCK8试剂与细胞培养基混匀的问题：考虑到孵育时每孔蒸发量不一样，所以在加CCK8时，应该将旧的培养基吸出，加入新鲜的细胞培养基与CCK8混匀液（100：10）进行检测。
