一种在菌落总数测定中防止芽胞杆菌 菌落弥漫生长的方法
发布时间：2022-02-24 浏览次数：769
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随着食品工业发展，食品种类越来越多，生产原料品种越来越广，加工工艺也越来越复杂，但微生物的污染仍然无法避免，特别是糕点、面点等含高淀粉类食品受芽胞杆菌污染的机率大，加工过程中难以彻底灭菌，菌落计数时琼脂平板上就会出现菌落弥漫生长的现象，导致菌落难以计数，对菌落总数检验项目的准确性造成严重的干扰。
需氧细菌的新陈代谢作用能将 2，3，5 － 三苯基氯化四氮唑（TTC）还原为红色的三苯甲臢（TPF），使得菌落呈红色，故可以将 TTC 作为细菌生长的指示剂，同时 TTC 对细菌的生长有一定的抑制作用。因 此，可以利用 TTC 这一特性，寻求抑制菌落弥漫生长的有效方法，便于菌落计数。
郑连宝，陈文祥，嵇林风等取适宜稀释度的枯草芽胞杆菌（ Bacillus subtilis）、蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）、大肠埃希菌（Escherichia coli） 、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），在平板计数琼脂培养基【平板计数琼脂（PCA）培养基】中分别添加 0.01% 、0.05% 、0.08% 、0.1% 、0.2% 、 0.3% 、0.4% 、0.5% 、0.8% 、1.0% TTC 水溶液，同时以不添加 TTC 的计数琼脂培养基作为对照，观察细菌的生长状况。结果 TTC 浓度为 0.2% ～ 0.3% 时，能有效防止枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌在计数琼脂培养基上出现菌落弥漫生长，同时对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的生长无显著影响。
不同浓度 TTC 对细菌生长的影响
当枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌菌液稀释浓度分别为 10 － 5 和 10 －6时，菌落数在适宜计数范围( 30 cfu/ml ～300 cfu/ml) 。
从表 1 可知，不同浓度 TTC 对细菌生长呈现不同的抑制效果。低浓度 TTC 对菌落总数计数无显著影响。
不同浓度 TTC 对枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌菌落形态的影响
由图1和图2所示，不同浓度 TTC 对枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌菌落形态也呈现出 3 种状态。
TTC 浓度为 0.2% ～ 0.3% 时，菌落颜色愈红，菌落形态与直径大小接近对照组，但计数平板上菌落弥漫生长现象基本消失。
综上所述，TTC 浓度为 0.2% ～ 0.3% 时，能有效防止枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌在计数琼脂上出现菌落弥漫生长，同时对细菌的生长无显著影响，而覆盖法防止菌落弥漫生长的效果欠佳。因此，食品微生物检验中测定菌落总数时，遇到易受芽胞杆菌污染的食品，可在琼脂中加入 0.2% ～ 0.3% 的 TTC 防止菌落出现弥漫现象而导致无法计数的情况发生。
内容来源：郑连宝,陈文祥,嵇林风,章小洪,丁琦,施华标.一种在菌落总数测定中防止芽胞杆菌菌落弥漫生长的方法[J].中国卫生检验杂志,2019,29(22):2715-2717.
