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鱼类罗湖病毒核酸检测试剂盒 PCR荧光探针法检测试剂盒

英文名称:RT-PCR Detection Kit for Tilapia Lake Virus (Fluorescent Probe Assay)

货 号 :FZ005AR2

规 格 :48测试/盒

用途:适用于水产样本中罗湖病毒(TiLV)的检测

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【产品名称】

通用名称:罗湖病毒(TiLV)核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)

【产品简介】

罗湖病毒核酸检测试剂盒适用于水产样本中罗湖病毒(TiLV)的检测。

【检测原理】

罗湖病毒核酸检测试剂盒基于实时荧光RT-PCR技术,针对TiLV第八基因节段设计引物和荧光探针并优化反应所需试剂组分,加入待检样品核酸即可进行扩增反应。在扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被Taq酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定TiLV是否检出。

【产品组分】

组分名称

规格×数量

裂解液

1 mL×2管

阳性对照

200 μL×1管

阴性对照

200 μL×1管

预混液

1 mL×1管

说明书

1份

【储存条件与保质期】

-20℃储存,有效期为9个月,避免反复冻融。

【灵敏度】

最低检验限:10-100 Copies/Test

【所需其他材料和适用仪器】

荧光定量PCR仪(具有能够检测FAM标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。

【使用指南】

1.        样品前处理

取适量(如50~100 mg)待检新鲜样品组织研磨,并加入1~5倍体积的生理盐水进行匀浆,取200 μL匀浆液,经商品化病毒RNA提取试剂盒提取获得相应的RNA待检样品,可于-20℃条件下暂存、待用。

2.        加样、反应

从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,分别进行如下操作。

1)        按照需求取n个PCR反应管(n=1管阴性对照+待检样品数+1管阳性对照),以上每管中分别加入20 μL预混液,待用。

2)        向上述n个反应管中分别加入阴性对照、DNA待检样品、阳性对照各5 μL,盖紧管盖,短暂离心,立即进行PCR扩增反应。

3)        PCR反应体系为25 μL,设置FAM检测通道读取,在反应阶段3中60℃时收集荧光信号,具体程序如下:

反应阶段

温度

时间

信号收集

循环数

1

42℃

10min


1

2

95℃

10 sec


1

3

95℃

5 sec


40

60℃

30 sec

注:对于ABI系列荧光定量PCR仪器,其反应体系中无需添加ROX,且在软件设置时,在“Passive Reference”和“Quencher”处均选择“None”。

3.        结果

一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。

1)        质量控制:

阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值>37,阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值<30。若阴阳性对照未同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

2)        结果判读:

① 无Ct值,且未出现典型的S型扩增曲线,为阴性结果,判定为TiLV未检出;

② Ct值≤37,且出现典型的S型扩增曲线,为阳性结果,判定为TiLV检出;

③ Ct值>37,且出现典型的S型扩增曲线,建议重新检测,若重检后Ct值≤37,且出现典型的S型扩增曲线,则判定为阳性结果,反之则为阴性结果。